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高效液相色谱仪在使用方面还是有些技巧的

  • 发布日期:2023-09-26      浏览次数:682
    •   高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。
        高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
        高效液相色谱仪的使用技巧:
        1、样品准备:样品准备对HPLC分析结果至关重要。确保样品纯净,并根据所需分离目标选择适当的提取、净化和浓缩方法。
        2、色谱柱选择:根据需要分离的化合物特性选择合适的色谱柱。考虑分离机理、柱填料类型、柱尺寸和固定相亲水/疏水性等因素。
        3、流动相选择:根据待分离物的极性选择合适的流动相组合。优化溶剂体系,平衡分辨率和保留时间。
        4、校准曲线:为了定量分析,建立准确的校准曲线并进行适当的验证。使用已知浓度的标准品制备一系列浓度点,并确定响应因子或检测灵敏度。
        5、进样方法:选择适当的进样方法,如自动进样器或手动进样。确保进样量恒定且符合仪器要求。
        6、温度控制:一些分析可能需要在特定温度下进行。使用恒温箱或列温控制器确保色谱柱处于稳定的温度条件下。
        7、检测器设置:根据目标化合物的特性选择合适的检测器。常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器(UV-Vis)、荧光检测器、电化学检测器等。
        8、数据分析:正确解释和分析HPLC数据是确保准确结果的关键。使用合适的软件进行峰识别、积分和定量计算。
        9、仪器维护:定期进行仪器维护和校准,包括清洗色谱柱、更换流动相溶剂和检查液压系统等。
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