高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
1、样品准备：样品准备对HPLC分析结果至关重要。确保样品纯净，并根据所需分离目标选择适当的提取、净化和浓缩方法。
2、色谱柱选择：根据需要分离的化合物特性选择合适的色谱柱。考虑分离机理、柱填料类型、柱尺寸和固定相亲水/疏水性等因素。
3、流动相选择：根据待分离物的极性选择合适的流动相组合。优化溶剂体系，平衡分辨率和保留时间。
4、校准曲线：为了定量分析，建立准确的校准曲线并进行适当的验证。使用已知浓度的标准品制备一系列浓度点，并确定响应因子或检测灵敏度。
5、进样方法：选择适当的进样方法，如自动进样器或手动进样。确保进样量恒定且符合仪器要求。
6、温度控制：一些分析可能需要在特定温度下进行。使用恒温箱或列温控制器确保色谱柱处于稳定的温度条件下。
7、检测器设置：根据目标化合物的特性选择合适的检测器。常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电化学检测器等。
8、数据分析：正确解释和分析HPLC数据是确保准确结果的关键。使用合适的软件进行峰识别、积分和定量计算。
9、仪器维护：定期进行仪器维护和校准，包括清洗色谱柱、更换流动相溶剂和检查液压系统等。
